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間充質干細胞的培養與使用注意事項

更新時間:2025-10-30點擊次數:853
臍帶間充質干細胞(hUC-MSCs)是從新生兒臍帶中提取的一種具有多潛能分化能力的干細胞。臍帶來源的間充質干細胞不僅保持了間充質干細 胞的生物學特性(表面抗原標記物,具有分化為成骨細胞、軟骨細胞及脂肪細胞等能力),而且相對于其它來源的間充質干細胞更加安全,更加原始,細胞的增殖、分化及免疫調節能力更強。
此外臍帶間充質干細胞還具取材方便易于分離、免疫原性低、無道德倫理問題限制、可獲得的細胞數量多、可實現大規模標準化生產等特征,擁有廣闊的臨床應用前景。本產品經過嚴格的質量控制和檢測,確保其安全性和有效性。
(1)當細胞密度達80%-90%即可進行傳代(注意細胞不能太密集,否則容易分化),棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的DPBS潤洗細胞1-2次;
(2)加1mL重組胰酶于培養瓶中,使消化液浸潤所有細胞,置于37℃培養箱中消化1-3min,在顯微鏡下觀察,直到細胞大部分細胞變圓并脫落 (視細胞情況而定)。
(3)加后裝入無菌離心管中,1000rpm離心5min,棄入3ml MSC培養基終止消化。輕輕打勻去上清液,補加1-2ml MSC培養基后吹勻。
(4)按照1:3或者1:4的比例進行傳代,或者細胞計數后以5-8×103cells/cm2 濃度接種至新的培養瓶中,補充相應體積的MSC培養基后,置于37℃,5%CO2培養箱中培養。
(5) 每2-3天換一次液,培養到2-4天待細胞生長密度達到80%左右,進行后續的傳代或者凍存操作。
‌消化時間‌:胰酶消化需控制在1分鐘左右,避免過度消化導致細胞損傷‌。
‌接種密度‌:按底面積1:3至1:4比例傳代,避免過密或過稀‌。
‌代次選擇‌:建議使用低代次細胞(如P2代)以保證實驗效果‌。
‌專用培養基‌:使用含生長因子的專用培養基,促進細胞增殖和分化‌。
 
 
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